本文摘要

在本文及其所涉及的完整版白皮書中，介紹了NanoSigh Pro開發的細胞外囊泡（EVs）的熒光標記和檢測方法，以及指導這些方法實施的代表性數據。

通過光散射和熒光分析評估細胞外囊泡大小分布和濃度。采用多種熒光染料和熒光基團，不僅正式了EVs的存在，而且還有效地檢測了其表面和內部RNA貨物上的四次跨膜蛋白生物標志物。

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細胞外囊泡（EVs）因其不斷發展的應用和突破而引起了人們越來越大的探索興趣，特別是在疾病診斷和治療潛力領域。這些由活生物體內的細胞產生的物質最初被認為是細胞廢物。然而，研究揭示了它們在細胞通訊中的關鍵作用。例如EVs的組成，可以反映其來源細胞的生理或病理狀態，使之成為一些列疾病的生物標志物，從癌癥到神經退行性疾病和炎癥性疾病。

準確表征EVs制劑的大小、異質性和濃度可分析、了解生物功能和診斷提供重要信息。但從體液中提取的細胞外囊泡伴隨著非EVs成分，形成了相當多樣化的異質的系統，這對分析表征提出了重大挑戰。

由于EVs的復雜性，通常采用多種技術方法來全面表征EVs，包括流式細胞術、蛋白質印跡、酶聯免疫吸附測定（ELISA）、質譜蛋白質組學、基于顯微鏡的方法和納米顆粒跟蹤分析（NTA）。

NTA已成為快速表征細胞外囊泡高分辨率大小和濃度的常用技術。

NTA光學裝置示意圖

在本文涉及的研究報告中，使用來自尿液的EVs，通過光散射和熒光分析評估其大小分布和濃度。采用多種熒光染料和熒光基團，通過直接標記抗體進行生物標志物檢測，使用NanoSight Pro對樣品進行納米顆粒跟蹤分析，對每次熒光測量應用適當的激光波長和熒光長通濾光片，在NS Xplorer軟件的專屬熒光模式下，可在單次測量中對光散射和熒光進行組合分析，不僅報告尺寸分布，還直接報告濃度和熒光效率。

本白皮書闡述了如何使用NanoSight Pro探索各種標記方法，遵循染料特性（例如光穩定性和亮度）、樣品制備方法（例如抗體親和力和特異性、孵育條件）和測量條件（例如樣品呈現、儀器設置、測量時間）等一些簡單的規則，來實現熒光NTA檢測EVs亞群，從而揭示細胞外囊泡EVs的不同特性。