HILIC 是分離高極性化合物的理想選擇

高極性化合物通常不能用我們熟知的典型色譜柱分離，即正相色譜（NP）或反相色譜（RP）。在正相色譜當中，由于化合物本身相對極性固定相來說過于粘稠，所以會導致洗脫時間過長。而高極性化合物的特點是在水性流動相中具有良好的溶解性，并且與典型的 NP 所用溶劑不兼容。而即使使用 RP 體系，高極性化合物卻幾乎不與非或弱極性的固定相進行相互作用，最終與溶劑前沿一起被洗脫，達不到分離的目的。

每當遇到這種情況的時候，就是 HILIC 的 Showtime！它的分離往往發生在極性固定相且可使用水的反相溶劑條件下。在這種情況下，與無水的流動相相比，含水流動相在極性固定相的表面形成了富水層。梯度洗脫從低極性有機溶劑開始，通過增加極性水的比例來洗脫極性化合物。

在正相色譜中固定相具有更高的極性，在反相色譜中流動相通常由水與有機溶劑組成，而水則是色譜常用流動相體系當中使用的最強極性洗脫劑。因此，HILIC 結合了正相色譜的固定相與反相色譜的流動相的特點來專門“對付”高極性化合物。簡單總結就是：HILIC 采用反相色譜流動相體系，而按照正相色譜順序出峰。

盡管 HILIC 的混合模式機制至今仍在研究中，但主要的保留機制被認為是化合物在富含有機物的流動相和后來的富含水的流動相之間分配系數的不同。除此之外，還包括其他相互作用，如氫鍵、靜電相互作用和偶極-偶極相互作用都有助于 HILIC 分離：

如果您對 HILIC 色譜也感到躍躍欲試的話，我推薦您使用乙腈，因為它與水具有良好的互溶性以及良好的 HILIC 保留和低粘度特點。當然，您也可以根據實驗具體情況選擇其他有機溶劑。HILIC 中的相對溶劑強度如下：

丙酮 < 丙醇 < 乙腈 < 乙醇 < 二惡烷 < DMF ~甲醇 < 水

就您的色譜固定相而言，任何極性相均可用于 HILIC 分離。例如：

選擇理想 HILIC 固定相的一個好的原則是，通常來講中性化合物的親水性低于帶電化合物，而高親水性固定相需要保留它們（例如兩性離子和酰胺固定相）。另一方面，由于靜電引力，帶電化合物在帶電色譜柱上的保留太強，因此中性和兩性離子相提供更好的結果。

其實，不管正相色譜、反相色譜還是 HILIC 色譜等，都有其最適合的應用領域。即便 HILIC 結合了正相色譜與反相色譜的部分特征，也不代表其滿足所有應用。就如同我們日常吃飯時，吃面往往用筷子是最簡單高效的方式；喝湯則是用勺子最佳。實驗亦如此，所以在實驗過程中還是要根據實際情況選擇最佳純化方式。