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【熱點應用】Zetasizer精準表征慢病毒載體 (LV) 顆粒粒徑及滴度

【熱點應用】Zetasizer精準表征慢病毒載體 (LV) 顆粒粒徑及滴度
馬爾文帕納科  2024-07-23  |  閱讀:2183

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本文通過介紹馬爾文帕納科納米粒度及電位儀Zetasizer Ultra用于慢病毒載體顆粒粒徑及載體滴度表征的實驗設置及檢測結果。讓您快速實現慢病毒載體(LV)關鍵質量屬性的評估。


慢病毒載體(Lentiviral vector, LV)是在HIV-1病毒基礎上改造而成的病毒載體系統,可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果。可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞,從而達到良好的的基因治療效果。對于一些較難轉染的細胞, 如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等,使用慢病毒載體,能大大提高目的基因或目的shRNA的轉導效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加,能夠比較方便快捷地實現目的基因或目的shRNA的長期、穩定表達。(部分內容來自百度百科)


所以,在體外實驗及體內實驗的研究中慢病毒載體(LV)與腺病毒(Ad)和腺相關病毒(AAV)同為主流的病毒載體系統。其顆粒粒徑約為90-120nm。


在慢病毒載體(LV)的生產工藝中,有無團聚體 (aggregate),以及載體滴度(titer)的高低是重點考察的關鍵質量屬性(CQAs)。Zetasizer Ultra納米粒度儀通過對LV顆粒的粒徑及載體滴度的表征,快速實現CQAs的測量。

圖片

Zetasizer Ultra 納米粒度電位儀



實驗方法設定


使用Zetasizer Ultra-Red以及小體積石英比色皿(ZEN2112)進行相應的粒徑和滴度測定。樣品測試體積為20μL,LV折射率、吸收率分別設置為1.45和0.001。



分析結果


通過多角度動態光散射(multi-angle DLS, MADLS)技術,我們對LV粒度大小及分布進行表征(圖1) 。圖中有兩個粒徑分布峰,分別位于106.4以及430.6nm,這說明體系中除了LV單體,還有團聚體產生。


  

圖片

圖1 LV樣品的光強粒徑分布圖


圖片

圖2 LV樣品的載體滴度


此外,除了基于MADLS技術得到的顆粒的準確粒徑分布圖,我們還得到對應尺寸的載體滴度信息(圖2)。可以看到LV單體的顆粒濃度約1x1012個顆粒/mL,團聚體顆粒濃度約為1x1010個顆粒/mL,僅為單體的1%。單體和聚集體濃度相差較大的情況下,Zetasizer仍可很好的區分單體和聚集體。


點擊拓展閱讀:Zetasizer用于rAAV顆粒粒徑及衣殼滴度


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